Annsci http://www.webaudiodirect.com 武漢安賽思生物醫藥技術有限公司 Tue, 05 Jan 2021 09:59:18 +0000 zh-CN hourly 1 https://wordpress.org/?v=5.5.3 組織病理學實驗服務 http://www.webaudiodirect.com/%e7%bb%84%e7%bb%87%e7%97%85%e7%90%86%e5%ad%a6%e5%ae%9e%e9%aa%8c%e6%9c%8d%e5%8a%a1/ http://www.webaudiodirect.com/%e7%bb%84%e7%bb%87%e7%97%85%e7%90%86%e5%ad%a6%e5%ae%9e%e9%aa%8c%e6%9c%8d%e5%8a%a1/#respond Tue, 05 Jan 2021 09:59:18 +0000 http://www.webaudiodirect.com/?p=1484  

免疫組化
? ? ? ? ? ? ? ? ? ?免疫組化

HE染色
? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?HE染色

Masson染色
? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? Masson染色

? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?PAS染色

? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 甲苯胺藍染色

? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?番紅-固綠染色

? ? ? ? ? ? ? ? ? 番紅固綠染色-植物
   

 

 

 

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甲苯胺藍染色服務 http://www.webaudiodirect.com/toluidine-blue-o-service/ http://www.webaudiodirect.com/toluidine-blue-o-service/#respond Tue, 05 Jan 2021 03:48:40 +0000 http://www.webaudiodirect.com/?p=1479 一、實驗背景

甲苯胺藍(Toluidine blue O,TB)是一種重要的嗜酸性噻嗪類染色劑,呈堿性,可與組織細胞中的酸性物質結合,是核酸染色的重要染色劑。其與細胞中DNA和RNA的酸性基團(包括羧酸、硫酸、磷酸鹽等基團)有著很強的親和性,可使細胞核染色。

甲苯胺藍染色一種非常成熟的染色技術,在當代生物研究中占有突出的地位,常用于DNA&RNA合成量非常高的腫瘤細胞或組織染色、有絲分裂活躍的細胞(如異常增生的上皮細胞等)、含有異色性物質(肝素、組織胺等)的肥大細胞等。

二、實驗流程

三、服務內容

1、完整的實驗報告(包含試劑、耗材、操作步驟、病理結果);

2、原始病理照片,可以提供2個倍數三個視野(100×,200×,400×任選);同時可提供全景掃描大圖;

3、如果客戶提供的是固定好的組織,可以提供包埋切片服務。

四、送樣要求

五、案例展示

甲苯胺藍染色-周圍神經組織
(來源:frontalcortex.com/)

六、聯系方式

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七、相關服務推薦

【參考文獻】

  1. Toluidine blue staining for cell and tissue biology applications. https://doi.org/10.1016/j.acthis.2018.11.005
  2. Assessment of human sperm DNA integrity using two cytochemical tests: Acridine orange test and toluidine blue assay. https://doi.org/10.1111/and.12765.
  3. https://en.wikipedia.org/wiki/Toluidine_blue_stain
  4. 甲苯胺藍染色在診斷子宮內膜病變中的研究進展. 國際婦產科學雜志,2013年.
  5. 甲苯胺藍活體染色發現早期口腔粘膜癌變的評價.臨床口腔醫學雜志2001 年

 

 

 

 

 

 

 

 

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番紅-固綠染色服務 http://www.webaudiodirect.com/%e7%95%aa%e7%ba%a2-%e5%9b%ba%e7%bb%bf%e6%9f%93%e8%89%b2%e6%9c%8d%e5%8a%a1/ http://www.webaudiodirect.com/%e7%95%aa%e7%ba%a2-%e5%9b%ba%e7%bb%bf%e6%9f%93%e8%89%b2%e6%9c%8d%e5%8a%a1/#respond Thu, 31 Dec 2020 06:18:27 +0000 http://www.webaudiodirect.com/?p=1458 一、實驗背景

番紅-固綠染色(軟骨)是起源于上世紀經典的番紅O(safranin O)-固綠(fast green)染色。番紅與固綠染料搭配不僅可以染色動物軟骨組織,還可以用于觀察植物組織。

 

  • 對于軟骨組織:

番紅O,能染色軟骨組織中的酸性蛋白多糖,是細胞軟骨形成的指示劑,可以直觀反映關節軟骨、軟骨下骨和骨組織的結構。在涉及關節軟骨及軟骨下骨的形態學研究中,常需要聯合使用多種染料以顯示其組織學結構。番紅O-固綠是常用搭配。染色后,軟骨呈紅色,其他是綠色。

  • 對于植物組織:

 

番紅可以染色維管束植物木質化、木栓化和角質化的組織。 固綠可以染色含有漿質的纖維素細胞組織。當植物組織被染色后,組織木質化的細胞壁和導管呈紅色;纖維素細胞壁和篩管呈綠色。

二、實驗流程

 

三、服務內容

  1. 完整的實驗報告(包含試劑、耗材、操作步驟、病理結果);
  2. 原始病理照片,可以提供2個倍數三個視野(100×,200×,400×任選);同時可提供全景掃描大圖;
  3. 如果客戶提供的是固定好的組織,可以提供包埋切片服務。

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五、案例展示

番紅固綠染色-軟骨組織
番紅固綠染色-軟骨組織 【2】

 

植物組織-番紅固綠染色
植物組織-番紅固綠染色【3】

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相關服務推薦

【參考文獻】

  1. http://www.ihcworld.com/_protocols/special_stains/safranin_o.htm
  2. Micro-computed tomography evaluation and pathological analyses of female rats with collagen-induced arthritis.Journal of Veterinary?Science?. http://dx.doi.org/10.4142/jvs.2015.16.2.165
  3. De novo assembly, transcriptome characterization, lignin accumulation, and anatomic characteristics: novel insights into lignin biosynthesis during celery leaf development. Scientific Reports,2015.DOI: 10.1038/srep08259.

 

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PAS染色服務 http://www.webaudiodirect.com/periodic-acid-schiff-staining-service/ http://www.webaudiodirect.com/periodic-acid-schiff-staining-service/#respond Thu, 31 Dec 2020 05:41:18 +0000 http://www.webaudiodirect.com/?p=1452 一、實驗背景

PAS染色,即是過碘酸-雪弗染色(Periodic-Acid Schiff)技術,主要檢測組織中的碳水化合物或者糖類化合物,如多糖、粘蛋白、糖原和真菌細胞壁成分等,常被用于檢測組織中的糖原,如骨骼肌、肝臟、心肌等。主要適用于福爾馬林固定、石蠟包埋的組織切片,或冰凍組織切片。

過碘酸與碳水化合物的反應是一個氧化過程,多糖與過碘酸反應會產生一種氧化化合物–乙醛。經過無色的雪弗堿性品紅固定后,乙醛會顯示出不同程度的紅色、粉紅色或品紅色。該反應的基礎是通PAS過淀粉酶將淀粉轉化為麥芽糖,然后再順序反應轉化為葡萄糖。在葡萄糖轉化過程中,會發生粉紅色顏色反應,這種顏色反應就說明了細胞內或細胞外都存在粘蛋白。然后再蘇木精或甲基綠用于進行核染色定位。

二、實驗流程

三、服務內容

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五、案例展示

腸組織PAS染色
腸組織PAS染色

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? 參考文獻:

【1】https://microbenotes.com/periodic-acid-schiff-pas-staining/

 

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Masson 染色服務 http://www.webaudiodirect.com/masson-staining-service/ http://www.webaudiodirect.com/masson-staining-service/#respond Fri, 25 Dec 2020 05:51:00 +0000 http://www.webaudiodirect.com/?p=1424 一、實驗背景

Masson染色,也即是馬松三色染色(Masson’s Trichrome Staining),是由法國組織病理學家馬松(Claude L. Pierre Masson)創造。Masson染色是一種經典的組織學染色方法,可選擇性地染色膠原纖維、肌肉纖維和紅細胞等。Masson染色之所以稱為三色,是因為在染色過程中使用了三種染色劑,第一種為用來染核的Weigert 鐵蘇木素,具有耐酸性的特點;第二種為可以識別酸性組織的酸性品紅,比如胞質、肌肉和膠原蛋白等;第三種為苯胺藍,特異染色膠原蛋白。其中第二種染料酸性品紅染色后用磷鉬酸處理,以去掉膠原蛋白的顏色,只留肌肉組織染紅色。

總之,Masson染色后,膠原纖維呈綠色或藍色、細胞核呈黑色,背景為紅色,可以用于區分膠原纖維與肌肉纖維;因為病變組織通常會發生結締組織(含有較多的膠原纖維)替代病變細胞的現象,如心肌梗死,肝硬化和腎纖維化等,所以用Masson染色能很好地發現病變部位,并能對病變進行定量的評估。

? ? 二、實驗流程

三、服務內容

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Masson染色服務

圖A- Masson染色大鼠呼吸道. 結締組織為藍色, 細胞核染成深黑色/紫色細胞質染成紅色/粉色.

圖B-Masson染色小鼠皮膚組織. 圖片來源: Wikipedia.

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HE染色服務 http://www.webaudiodirect.com/he-staining-service/ http://www.webaudiodirect.com/he-staining-service/#respond Fri, 25 Dec 2020 04:22:30 +0000 http://www.webaudiodirect.com/?p=1393 一、實驗背景

? ? ? ? ? HE染色是蘇木精-伊紅染色的簡稱,是組織病理學中應用最廣泛的染色技術。顧名思義,HE染色使用的是兩種染料的組合,即蘇木精(Hematoxylin )和伊紅(Eosin)。這種組合可以使不同的組織成分染色成不同程度的顏色,使其易于觀察。

? ? ? ? ? HE染色背后的原理是組織與染料之間的化學吸引力。蘇木精是一種堿性染料,可以使嗜堿性的組織結構染色為藍紫色,這些嗜堿性結構主要是指含有核酸的組織結構,如富含RNA的染色質、核糖體和胞質區等。而酸性的伊紅則作為復染劑使紅細胞、細胞質、肌肉和膠原蛋白等基本組織結構標記成不同程度的粉色、橙色和紅色。通過HE染色可以做出初步的病理診斷,以此為基礎發現尋求更全面的檢測方法,以達到準確,完整的病理診斷。

二、實驗流程

三、服務內容

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圖1.小鼠組織HE染色. 分別為:腎臟、心臟、肺(縱切)

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SDS-PAGE(聚丙烯酰胺)蛋白電泳原理詳解 http://www.webaudiodirect.com/sds-page/ http://www.webaudiodirect.com/sds-page/#respond Wed, 02 Dec 2020 06:39:04 +0000 http://www.webaudiodirect.com/?p=1367 Western blot是一項在復雜樣本中檢測蛋白質表達水平的技術,至今已有超過40年的歷史,并成為了蛋白質研究中最常用的工具之一。

WB流程一般是這樣的:首先通過SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝膠電泳使蛋白質樣本分離,再將凝膠上的蛋白電泳轉移到固相載體上(NC膜或者PVDF膜),方便后續印跡顯影操作,然后使用封閉液將封閉非特異位點,以避免抗體的非特異性吸附,這樣固定的蛋白質即可與特異性的多克隆或單克隆抗體相互作用。最后通過化學發光法或熒光方法進行蛋白條帶顯影。

其中SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳條件是關系到蛋白條帶是否均一、整齊、干凈的關鍵步驟,下面小編整理了SDS-PAGE電泳的原理與操作關鍵,為你理清每一個關鍵試劑和操作的背后的故事。

 

SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝膠電泳的原理和步驟

SDS-PAGE?(十二烷基硫酸鈉–聚丙烯酰胺,sodium dodecyl sulfate – polyacrylamide gel electrophoresis)凝膠電泳是一種可以根據蛋白質的分子量分離樣本中蛋白的技術。在電荷的影響下分離大分子稱為電泳(electrophoresis)。在SDS-PAGE中使用的凝膠是聚丙烯酰胺(polyacrylamide),使蛋白質呈線性化的試劑是SDS。 因此得名SDS-PAGE。

(一)SDS-PAGE的原理:

首先準備一套蛋白電泳設備,蛋白質樣品和marker上樣到凝膠孔中,設置電壓,啟動電泳程序。通常樣本中會添加一種還原劑,如巰基乙醇或二硫蘇糖醇(DTT)(在洗滌劑的存在下,如SDS),可以打開折疊蛋白質的二硫鍵;而樣本中加入的SDS洗滌劑可以給所有蛋白質加上負電荷,從而將它們線性化成多肽。聚丙烯酰胺則是多肽電泳分離的介質。多肽在電場的作用下向陽極方向泳動。

蛋白電泳的遷移率與一下三個因素有關:

  • 形狀—所有的蛋白質在用還原劑處理后都處于一級結構中。 因此,形狀不影響蛋白質的分離。
  • 電荷—經過SDS處理后,所有的蛋白質都是負電荷, 因此,電荷不影響分離。
  • 大小—蛋白質的分離完全與它們的分子量大小有關。

在電泳中,分子量越小的多肽移動得越快,因為它們遇到的阻力更小。分子量越大的多肽移動得更慢,因為它們遇到的阻力更大。因此蛋白質完全是因為分子量大小的不同而分開(如圖1)。

SDS-PAGE電泳原理

圖1.SDS-PAGE電泳原理

(二)SDS-PAGE電泳中各主要試劑的作用:

1. β-巰基乙醇/二硫蘇糖醇(DTT)

β-巰基乙醇或二硫蘇糖醇(DTT)做為還原劑添加入樣品中,可以還原(分解)存在于蛋白質的肽鏈上半胱氨酸殘基之間的二硫鍵(S-S鍵)。S-S鍵使蛋白質折疊形成二級結構。因為蛋白的構象會干擾電泳的遷移率。所以,當電泳時,消除蛋白構象對遷移率的干擾非常重要。β-巰基乙醇還原蛋白的二硫鍵為游離的-SH,樣本中所有的蛋白都變成線性的一級結構,使其電泳遷移率只與蛋白分子量有關(圖1)。

2. 十二烷基硫酸鈉 (SDS)

在制備SDS-PAGE樣品時,將SDS混合在樣品緩沖液中。 蛋白樣本用β-巰基乙醇處理后解聚成單一線性;用SDS處理后,所有蛋白質均只帶負電荷。 SDS可以使所有的蛋白質分子均勻的帶上負電荷(圖01)。 因此,當施加電壓時,所有的蛋白質都向凝膠的正極遷移。 因為,不同大小的蛋白質得到的負電荷與其分子量成正比,它們只因為分子量大小的不同而分離開,而不是因為帶電荷的多少或者蛋白構象。 在凝膠中也存在SDS,這是為了確保所有的蛋白質在整個凝膠中保持荷載負電荷。

3.溴酚藍 (BPB)

溴酚藍是電泳中的示蹤染料,用于監測各個蛋白分子電泳過程的進展。 BPB與樣品蛋白混合后上樣,當電泳開始時,BPB與蛋白質一起遷移,但速度更快,會比樣品中的任何蛋白質更快到達凝膠的末端,甚至緩沖液中的甘氨酸分子也在BPB之后到達末端。 BPB帶有輕微的負電荷,這就是為什么它可以向陽極遷移,同時又可以作為蛋白質分子的示蹤染料。

4. 聚丙烯酰胺凝膠

聚丙烯酰胺凝膠是通過使用少量的交聯劑(如N,N‘-亞甲基雙丙烯酰胺)使單體丙烯酰胺在水中的聚合而成。因此,丙烯酰胺(Acrylamide)和雙丙烯酰胺(Bis-acrylamide)共聚形成了丙烯酰胺的直鏈與雙丙烯酰胺的相互聯結形成三維網絡結構。

丙烯酰胺(acrylamide)的直鏈與雙丙烯酰胺(bisacryamide)的相互聯結形成三維網絡結構

圖2: 丙烯酰胺(acrylamide)的直鏈與雙丙烯酰胺(bisacryamide)的相互聯結形成三維網絡結構

有其他的交聯劑可以代替雙丙烯酰胺(bisacrylamide),如:

  • 哌嗪二丙烯酸酯 (PDA)?–-可以用于降低SDS-PAGE膠的銀染背景;
  • N,N’- 酒石酸雙丙烯銑胺 (DATD)?–一種可以破壞交聯劑而使凝膠可溶的試劑;

丙烯酰胺和雙丙烯酰胺的比例決定了凝膠的孔徑。 因此,在不連續凝膠體系中,會有不同濃度和pH的濃縮膠和分離膠。

那么,濃縮膠是如何工作的呢?

濃縮膠的目的是將需要分離的蛋白質混合物聚集在濃縮膠和分離膠的分界線上。 因此,所有的蛋白質首先被壓縮累積在分界線上,然后,在大約同一時間進入分離凝膠,無論蛋白質的大小是多少。

2種分子與此有關:

  • 緊隨其后的來自Tris-Gly電泳緩沖液的甘氨酸分子
  • 具備牽引作用的來自Tris-HCL 電泳緩沖液的氯化物離子

當施加電壓后,甘氨酸分子(最簡單的氨基酸)和Cl-開始通過凝膠向正極遷移。 由于甘氨酸分子在濃縮膠中以兩性離子的形式存在,其電泳遷移速率非常慢。 氯離子比甘氨酸分子遷移得更快,產生了不平衡的正反離子區域,從而在氯離子和甘氨酸離子之間形成了很大的電壓梯度。 在甘氨酸分子(最慢的)和氯離子(最快的)之間存在樣本混合物中的所有蛋白質(圖03)。樣品分子在氯化物和甘氨酸之間中間遷移,逐漸被壓縮成非常薄而清晰的蛋白層,方便后面更好的蛋白分離。

在這個階段,樣本蛋白分子處于兩種離子(后面的甘氨酸和前面的氯離子Cl-)之間,在濃縮膠和分離膠之間形成薄薄的一層。

濃縮膠的作用

圖3: 濃縮膠的作用

當蛋白分子到達分離膠界面時發生了什么?

當到達分離膠時,pH值增大,孔徑急劇減小。在更高的pH值下,甘氨酸分子不再以兩性離子的形式存在,它們在這個階段就會電離,并開始比在濃縮膠中時遷移得更快。 氯離子Cl-很快就會向陽極遷移。 因此,一旦蛋白質不堆積,甘氨酸分子很快難以束縛樣品蛋白質分子,蛋白質分子開始在電流的作用下按照分子量大小自由的分離。 (圖4)

蛋白分子到達分離膠界面圖4.

 

積層膠 分離膠
聚丙烯酰胺濃度
孔徑大小 更大 更小
Tris-HCl 的pH值 6.8 8.8
目的 使多肽鏈積聚在濃縮膠和分離膠的界線上 根據分子量大小分離多肽分子

 

  1. 過硫酸銨(APS)和TEMED

凝膠的聚合是通過自由基機制發生的。 TEMED(N,N,N,N-四甲基乙二胺)作為催化劑,生成硫酸鹽自由基。過硫酸銨是提供形成自由基的硫酸鹽基團的。 這些用于自由基生成的硫酸鹽由過硫酸銨提供,如圖02所示。

?

(三)SDS-PAGE凝膠電泳的主要步驟:

1. 先制備和灌注分離膠:

制備分離膠需要兩塊玻璃板,一個短板,一個長板,將兩塊玻璃板夾在制膠架上(圖5),灌膠完成后,加異丙醇趕走凝膠上面的氣泡。關于灌膠的高度,這可以通過放置梳子確定,一般大約梳子下1cm,用筆標記制膠的高度,開始灌膠,加異丙醇封膠。等待膠凝固后,倒掉上層異丙醇,用吸水紙吸干異丙醇。

DS PAGE制膠架

圖05:? SDS PAGE制膠架

2. 再制備和灌注濃縮膠:

當下層的分離膠凝固后,就可以開始直接加積層膠至玻璃最上層,然后插入梳子。等待積層膠凝固后,小心拔出梳子,避免用力過猛破壞了凝膠上樣孔。

3. 點樣至凝膠孔中:

用微量移液器向凝膠孔中依次加入蛋白marker和樣本,蛋白marker是已知蛋白條帶分子量的預染蛋白,可作為標定蛋白大小的標尺參考。然后依次點入其他樣本至凝膠孔中。每孔的樣本上樣量保持一致(主要是質量一致),加樣時要小心,確保不損壞加樣孔的尺寸或不將樣品溢出孔外,更不能把樣本加到孔外。 在這個階段,蛋白質的樣品是藍色的,因為在制備樣品時使用了電泳指示劑染料–溴酚藍。

上樣至孔中

圖. 06: 上樣至孔中

4. 設定電泳條件,啟動電泳:

將凝膠和玻璃板浸入電泳緩沖液中后,就可以開始設定電壓和時間,開始電泳了。 當示蹤染料到達或穿過凝膠時,停止電泳。

5. 分析蛋白條帶

考馬斯亮藍染色或者進行蛋白轉膜以進行后續的免疫印跡實驗;
用去離子水沖洗凝膠3-5次,以去除SDS和緩沖液。 它可能會阻礙染料(0.1%考馬斯藍)與蛋白質的結合。 然后將凝膠浸泡在考馬斯藍染液中染色,室溫,搖床孵育。 一般蛋白質條帶會在幾分鐘內開始出現,但完全染色大約需要1小時(圖06)。

 

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提供專業的實驗服務與試劑盒定制

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多色共染,助力高水平文章發表

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精確定位、定性及相對定量基因表達

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